黴菌的形態觀察實驗！

一、實驗目的：瞭解黴菌形態，掌握微生物載玻片溼室培養方法。

實驗內容 1．根黴假根的觀察。 2．黴菌載玻片溼室培養。 3．麴黴、青黴、根黴、毛黴形態觀察。

二、實驗材料和用具

產黃青黴(Penicfillium chrysogenum)、黑麴黴(Aspergillus niger)、黑根黴(Rhizopus nigrians)、總狀毛黴(Mucor racemosus)等斜面菌種。

半固體PDA培養基、乳酸苯酚固定液、棉藍染色液、20%甘油；

透明膠帶、剪刀、培養皿、載玻片、口形玻棒擱架、蓋玻片、圓形濾紙片、細口滴管、鑷子、顯微鏡、接種環。

三、操作步驟

(一)黴菌的載玻片溼室培養

可4人合作，每人制作一黴菌的載玻片。

1．準備溼室 在培養皿底鋪一張圓形濾紙片，其上放一“冂”形載玻片擱架，在擱樑上放一塊載玻片和兩塊蓋玻片，蓋上皿蓋，外用紙包紮，經121℃溼熱滅菌30min後，置60℃烘箱中烘乾，備用。

2．接種 用接種環挑取少量待觀察的黴菌孢子至溼室內的載玻片上，每張載玻片可接同一菌種的孢子兩處。接種時只要將帶菌的接種環在載玻片上輕輕碰幾下即可(務必記住接種的位置)。

3．加培養基 用無菌細口滴管吸取少量融化約60℃的培養基，滴加到載玻片的接種處，培養基應滴得圓而薄，其直徑約爲0.5cm(滴加量一般以1/2小滴爲宜)。

4．加蓋玻片 在培養基未徹底凝固前．用無菌鑷子將皿內蓋玻片蓋在瓊脂塊薄層上，用鑷子輕壓，使蓋玻片和載玻片間的距離相當接近，但不能壓扁，否則不透氣。

5．倒保溼劑 每皿倒大約3mL 20%的無菌甘油，使皿內的濾紙完全潤溼，以保持皿內溼度，皿蓋上註明菌名、組別和接種日期。此爲製成的載玻片溼室，置28℃恆溫培養3～5d。

(二)黑根黴假根的培養

將融化的PDA培養基，冷卻至50℃倒入無菌平皿，其量約爲平皿高度的1/2。冷凝後，用接種環沾取根黴孢子，在平板表面劃線接種。然後將平皿倒置，在皿蓋內放一無菌載玻片，於28℃培養2～3d後，可見根黴的氣生菌絲倒掛成鬍鬚狀，有許多菌絲與載玻片接觸，並在載玻片上分化出假根和匍匐菌絲等結構。

(三)鏡檢觀察

1．溼室培養黴菌鏡檢載玻片 從培養16～20h開始，通過連續觀察，可瞭解孢子的萌發、菌絲體的生長分化和子實體的形成過程。將溼室內的載玻片取出，直接置於低倍鏡和高倍鏡下觀察麴黴、青黴、毛黴、根黴等黴菌的形態，重點觀察菌絲是否分隔，麴黴和青黴的分生孢子形成特點，麴黴的足細胞，根黴和毛黴的孢子囊和孢囊孢子繪圖。

2．粘片觀察 取一滴棉藍染色液置於載玻片中央，取一段透明膠帶，打開黴菌平板培養物，粘取菌體，粘面朝下，放在染液上。鏡檢。

3．假根觀察 將培養根黴假根的平皿打開，取出皿蓋內的載玻片標本，在附着菌絲體的一面蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。只要用低倍鏡就能觀察到假根及從根節上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和兩個假根間的匍匐菌絲，觀察時注意調節焦距以看清各種構造。

4．製成永久裝片 把觀察到黴菌形態較清晰，完整的片子，製成標本作較長期保存。製備方法是，輕輕揭去蓋玻片，如果載玻片上有瓊脂，仔細挑去，然後滴加少量乳酸苯酚固定液，蓋上清潔蓋玻片，在蓋玻片四周滴加樹膠封固。

四、注意事項

載玻片溼室培養時，蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此有極小縫隙，一是爲了通氣；二是使各部分結構平行排列，易於觀察。

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